STA No. 356：用于评估类似或修改的体外光毒性重建人表皮（RhE）试验方法（用于测试局部施用物质，如测试指南498所述）的性能标准

内容提要：

本文件由经济合作与发展组织（OECD）化学品与生物技术委员会发布，属于《测试与评估系列》第356号。该文件为评估与OECD测试指南498（TG 498）中所述的重建人表皮（RhE）光毒性试验方法在结构和机制上相似或经过修改的试验方法提供了性能标准（PS），旨在帮助判定新的“类似”或“修改”方法是否具有足够的可靠性和相关性，可用于识别局部施用物质的光毒性潜力。

性能标准主要包括三部分内容：基本测试方法组件、最低限度参考化学品清单以及规定的可靠性和预测能力目标值。所采用的已验证参考方法（VRM）为TG 498中描述的EpiDerm™光毒性试验方法。

一、基本测试方法组件

文件详细规定了类似或修改方法必须包含的关键要素：

1. 组织模型构建：必须使用人角质形成细胞在带有多孔合成膜的支持物上构建三维RhE模型。模型应包含多层活细胞上皮（基底层、棘层、颗粒层）和功能性角质层，其脂质组成应足以形成有效的皮肤屏障功能，并通过基准化学品（如SDS或Triton X-100）的IC50或ET50进行验证。模型需无细菌、病毒、支原体及真菌污染。

2. 细胞活力测定：必须采用MTT法量化组织活力。MTT被活细胞还原为蓝紫色的甲瓒沉淀，经异丙醇提取后用分光光度计（OD 570 nm）或HPLC/UPLC-分光光度法检测。对于可能干扰MTT测定的化学物（如直接还原MTT或颜色干扰），需采用非特异性MTT还原（NSMTT）和非特异性颜色（NSC）等额外对照进行校正。

3. 辐照条件：VRM中采用约6 J/cm²的UVA辐照剂量（60分钟内，辐照度1.7 mW/cm²），该剂量对组织无细胞毒性但足以激发光毒性反应。若使用不同光源或剂量，需确保不损伤细胞且足以激发标准光毒素。

4. 试验程序：每个浓度和对照至少使用2个组织重复。液体或固体化学物应均匀覆盖表皮表面（VRM最小用量25 μL/0.6 cm²）。化学物暴露时间、辐照期和孵育温度需针对各RhE模型优化。VRM的典型条件为：化学物暴露21±3小时，辐照60±5分钟，辐照后继续孵育21±3小时。

5. 预测模型：计算各浓度在“加光”与“避光”条件下的相对细胞活力。若任一浓度的加光处理导致细胞活力下降超过30%（相对于避光对照），则预测为具有光毒性；否则预测为无光毒性。

二、最低限度参考化学品清单

列出了12种参考化学品，包括6种光毒性物质（如盐酸氯丙嗪、蒽、未纯化香柠檬油等）和6种非光毒性物质（如十二烷基硫酸钠、水杨酸辛酯、对氨基苯甲酸等）。这些化学品覆盖了不同的化学类别和光毒性效力范围。开发者应至少使用这些化学品评估新方法的性能。

三、规定的可靠性和预测能力值

要求新方法在至少三个实验室中对12种参考化学品进行测试，每种化学品进行3次独立实验。性能目标为：实验室内部预测一致性≥90%；实验室间预测一致性≥80%；灵敏度、特异性和准确度均≥80%（VRM的相应值为87%、93%）。

该PS为RhE光毒性试验方法的类似或修改版本提供了标准化的验证框架，有助于推动基于人重建表皮模型的体外替代方法在光毒性测试领域的国际认可与监管应用。

STA No. 356：Performance Standards for the Assessment of Proposed Similar or Modified in Vitro Phototoxicity Reconstructed Human Epidermis (RhE) Test Methods for Testing of Topically Applied Substances, as describe.pdf